以下是關(guān)于超微量分光光度計校準方式的詳細解析，涵蓋核心步驟、技術(shù)要點(diǎn)及注意事項：

　　***、儀器自校準功能

　　1. 原理與目的

　　超微量分光光度計通常內置自校準程序，通過(guò)儀器自帶的標準參數(如暗電流校正、光源強度補償)對光學(xué)系統進(jìn)行初始化標定。自校準可快速修正電子漂移、光源老化等引起的偏差，是日常維護的基礎步驟。

　　2. 操作步驟

　　- 進(jìn)入儀器菜單，選擇“自校準”或“性能驗證”模式；

　　- 按提示執行空白測量(如空氣或純水作為參比)；

　　- 儀器自動(dòng)調整至出廠(chǎng)預設參數，并生成校準報告。

　　3. 局限性

　　自校準無(wú)法糾正波長(cháng)偏移或光路物理變化(如光纖位移)，需結合其他方法定期驗證。

　　二、外部標準溶液校準

　　1. 適用場(chǎng)景

　　當儀器用于定量分析(如核酸、蛋白濃度測定)時(shí)，需通過(guò)標準溶液驗證吸光度準確性。常用標準物質(zhì)包括：

　　- 霍姆斯緩沖液(Horseradish Peroxidase, HRP)：用于紫外區(230 nm、260 nm、280 nm)校準；

　　- 中性密度濾光片：驗證吸光度線(xiàn)性范圍(0-4 OD)；

　　- NIST追溯標準溶液(如重鉻酸鉀溶液)：用于多波長(cháng)交叉驗證。

　　2. 操作要點(diǎn)

　　- 液柱形成：超微量?jì)x依賴(lài)基座檢測模式，需用移液槍精確滴加0.3-2 μL標準液，形成穩定液柱(光程0.05-0.5 mm)；

　　- 多點(diǎn)校準：在目標波長(cháng)(如260 nm測RNA)下測量不同濃度標準品，繪制標準曲線(xiàn)，計算儀器線(xiàn)性相關(guān)系數(R2>0.995為合格)；

　　- 空白對照：使用同批次溶劑(如超純水)作為參比，避免溶劑雜質(zhì)干擾。

　　三、波長(cháng)校準

　　1. 必要性

　　波長(cháng)準確性直接影響定性分析(如特征吸收峰識別)。超微量?jì)x的氙燈光源或LED光源可能發(fā)生波長(cháng)漂移，需定期校驗。

　　2. 校準方法

　　- 汞燈特征譜線(xiàn)法：利用汞燈在253.6 nm、296.7 nm等處的尖銳吸收峰，對比儀器顯示波長(cháng)與實(shí)際峰值偏差(應<±1 nm)；

　　- Horia溶液法：通過(guò)鈥玻璃在可見(jiàn)光區的多條特征吸收峰(如486 nm、536 nm)進(jìn)行多點(diǎn)校準；

　　- 軟件校準：部分機型支持自動(dòng)掃描標準濾光片，通過(guò)算法修正波長(cháng)偏移。

　　四、穩定性與重復性檢測

　　1. 短期穩定性

　　- 連續測量同***標準樣品(如1 mg/mL BSA溶液)至少6次，記錄吸光度值(如280 nm下誤差應<±0.005 OD)；

　　- 檢查基線(xiàn)噪聲(通常要求<0.002 OD)以評估光路穩定性。

　　2. 長(cháng)期穩定性

　　- 每月進(jìn)行***次全波長(cháng)范圍(200-1000 nm)的基線(xiàn)掃描，觀(guān)察雜散光和波長(cháng)重復性；

　　- 使用標準溶液周期性驗證(如每周***次)，記錄偏差趨勢。

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